PADRONIZAÇÃO DO USO DO PAPEL FILTRO NO DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO DA INFECÇÃO POR TRYPANOSOMA VIVAX EM BOVINOS E ANÁLISE DE COINFECÇÕES COM OUTROS PATÓGENOS

Abstract

A tripanossomíase bovina é uma doença difundida por todo território brasileiro, mas, sua sintomatologia pouco específica dificulta o diagnóstico clínico, sendo necessária a realização de exames laboratoriais para a confirmação da enfermidade. A busca por métodos diagnósticos que sejam confiáveis é constante, porém, observa-se ainda a dificuldade no envio de amostras em tempo hábil aos centros laboratoriais, principalmente em regiões distantes dos laboratórios de referência. O presente estudo teve por objetivo a padronização e validação do uso do papel filtro (PF) impregnado com soro bovino para detecção de anticorpos anti-T. vivax por Imunofluorescência Indireta (IFI) e a validação da técnica a campo. Durante a padronização da técnica observou-se que a gramatura ideal de PF foi de 250 G, a quantidade de soro dispensada no PF deveria ser de 100 L e os eluatos deveriam ser obtidos através de 12 círculos de 3mm cada, eluidos em 350 L de solução tampão fosfato salina (PBS) + 3% de soro fetal bovino (SFB), observando a diluição ideal de conjugado a ser utilizada de 1:250. O processo também identificou a viabilidade do PF mantido em temperatura ambiente por até 4 meses. Já a validação da técnica foi feita utilizando amostras de sangue de 83 bovinos, fêmeas, meio sangue holandês, com idade igual ou superior a 24 meses, que foram coletadas em tubos sem anticoagulantes e mantidas em temperatura ambiente (TA) para obtenção dos soros que em seguida, foram parte transferidos para tubos plásticos com tampa do tipo eppendorf (500 L) e congelados e outra parte foi aplicado em PF e que posteriormente foram adsorvidos. Os resultados da validação a campo foram baseados na comparação entre resultados de IFI obtidos através do soro congelado e de amostras eluidas em PF. Tomando como base o teste de IFI com soro convencional, a técnica de IFI utilizando como material eluato de PF apresentou 72 (86,75%) resultados semelhantes aqueles apresentados pela IFI com soro congelado enquanto 11 amostras (13,25%) apresentaram resultados divergentes entre os dois métodos avaliados. O índice Kappa encontrado foi de 0,64, indicando concordância substancial entre os dois testes avaliados, demonstrando a boa aplicabilidade do PF para realização de IFI na pesquisa de anticorpos IgG anti-T. vivax