AVALIAÇÃO DA FORMAÇÃO DO BIOFILME DE Candida albicans e Streptococcus mutans NA PRESENÇA DE COLOSTRO HUMANO: INFLUÊNCIA DA 3’ SIALOLACTOSE NA BIOMASSA MICROBIANA

Abstract

A cavidade bucal é a principal porta de entrada de inúmeros micro-organismos, sendo que alguns podem formar biofilmes e causar doenças. A organização em biofilmes representa o maior desafio para a ação antimicrobiana e inúmeros estudos buscam formas de controle do seu desenvolvimento. O aleitamento materno representa uma importante fonte nutricional e imunológica para o neonato, que está em um momento crítico para a aquisição de processos infecciosos, pois o seu sistema imunológico de mucosas está em desenvolvimento. O colostro possui inúmeros componentes de defesa como a 3’ Sialolactose que é um oligossacarídeo que parece ter uma atividade antimicrobiana. Há controvérsias que precisam ser investigadas sobre a influência do colostro (C) na formação de biofilmes orais, como os formados pela Candida albicans (CA) e Streptococcus mutans (SM) que são os agentes etiológicos primários de doenças orais comuns na infância, como a Cândidos oral e cárie respectivamente. O objetivo do presente estudo foi avaliar in vitro a adesão inicial e a biomassa formada de biofilme de SM e CA em presença de (C) com ou sem saliva (S) e 3’ Sialolactose (SI). Para tanto, 30 amostras de colostro e de saliva de recém-nascidos de indivíduos de boa saúde geral e oral foram coletadas após o parto. Os ensaios foram divididos em grupos que receberam o colostro antes (C-A), durante (C-DU) e após 24 horas (C-DE) da aplicação da cultura microbiana. Também foram testadas a aplicação da saliva somente (S-A) e em conjunto com o colostro (C+S-A) antes da formação do biofilme. Já os grupos com 3’ Sialolactose receberam o oligossacarídeo em duas concentrações antes (SI-A), durante (SI-DU) e depois (SI-DE) do inóculo microbiano. Estes grupos experimentais foram comparados com biofilmes de 24h (B24h) e de 48h (B48h). Os biofilmes foram desenvolvidos em placas estéreis de 96 poços com culturas frescas de 24 horas incubadas a 37o C. Os biofilmes formados foram fixados com formaldeído a 10% e posteriormente corados com cristal violeta a 0,1%. Após lavagem com água destilada, ressuspensão e eluição com álcool absoluto, as densidades ópticas foram mensuradas a 490 nm em espectrofotômetro digital. As comparações da quantidade de biomassa formada foram comparadas e analisadas por ANOVA seguido pelo pós-teste de Bonferroni. As frequências de amostras que aumentaram ou diminuíram os biofilmes foram comparadas entre os grupos e foi empregado o teste do Qui-Quadrado e teste Exato de Fisher. Utilizou-se o teste de Correlação de Pearson para comparar os grupos do estudo. Um valor de p<0,05 foi considerado estatisticamente significante. Os resultados dos ensaios de biofilme de SM mostraram que no grupo SM-C-A, em que o colostro foi aplicado antes, formou biofilme de mesma quantidade que no controle (p>0,05). Por outro lado, nos grupos em que os colostros foram aplicados concomitante ou após o SM (grupos SM-C-DU

e SM-C-DE) houve uma redução significativa da DO obtida (p<0,05). A presença de saliva aumentou a biomassa do biofilme de SM (p<0,05). Os resultados dos biofilmes de CA mostraram que o biofilme formado nos grupos CA-C-A e CA-C-DE não foram diferentes dos controles (p<0,05), mas quando o colostro foi aplicado na presença de saliva (CA-S-A), a DO dos biofilmes foi menor estatisticamente que das obtidas nos grupos controles (p<0,05). A aplicação de Sialolactose reduziu a formação do biofilme de SM e CA, tanto no SM-SI-A-10 e SM-SI-A-20 quanto no SM-SI-DU-20 (p<0,05). O presente estudo permitiu concluir que a saliva ajudou a proliferação do biofilme de SM e que o colostro não impediu a adesão inicial de SM, mas interferiu no acúmulo e desenvolvimento dos microorganismos em biofilmes. Os resultados dos ensaios de CA permitiram concluir que o colostro não altera a adesão e nem mesmo o crescimento de CA, mas a saliva reduz a densidade da biomassa fúngica. A 3’ Sialolactose interfere na adesão e crescimento tanto no biofilme de CA como de SM, sendo um importante componente do colostro com atividade antimicrobiana.